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在液相色譜上遇到的問題有很多，例如HPLC 色譜柱的一些常見問題時有出現(xiàn)，可能會令很多實驗員感到非常沮喪。那么今天，景源帶您了解這些是什么以及如何解決它們可以讓您避免數(shù)小時的挫敗感。

一、無峰值：

       可能有多種因素會導(dǎo)致 HPLC 輸出中不出現(xiàn)峰或出現(xiàn)非常小的峰。正常讀數(shù)應(yīng)該又大又細(xì)的峰值，高度也是會有不一樣的。小峰或沒峰可能代表檢測器燈已關(guān)閉，沒有流動相流量和樣品丟失或變質(zhì)，或者檢測器、積分器、進(jìn)樣器閥或記錄器這些有問題存在。

     其實先要確保探測器是打開狀態(tài)，然后檢查所有連接情況。確保自動進(jìn)樣器樣品瓶中有足夠的液體和樣品中無氣泡情況出現(xiàn)，并使用新的標(biāo)液重新進(jìn)行系統(tǒng)的檢查。

二、無流量：

       如果沒有出峰，很有可能是HPLC 色譜柱中沒有流量；也可能意味著泵已關(guān)閉或流量因某種原因中斷或受阻；同時泵頭中也可能存在泄漏或空氣滯留。

       如果泵關(guān)閉，需要啟動泵并檢查儲液器中的流動相液位和整個系統(tǒng)的流量情況。檢查樣品環(huán)是否有其他障礙物或氣塞，并確保流動相組分可混溶且流動相是否能夠進(jìn)行正常脫氣。繼續(xù)檢查系統(tǒng)松動情況，檢查泵是否有泄漏等其他問題。

三、壓力問題：

      要是壓力低于平常或無壓力這有可能是系統(tǒng)某處發(fā)生泄漏或空氣滯留；要是系統(tǒng)壓力過高，那么泵、進(jìn)樣器、在線過濾器、保護(hù)柱、分析柱或管路都可能有問題。

      如果是檢查發(fā)現(xiàn)是低壓，那就要檢查整個色譜系統(tǒng)是否存在泄漏、泵密封件故障或閥門損壞的情況等。如果是高壓的話，先從移除保護(hù)柱和分析柱，并用接頭替換，將進(jìn)樣器重新連接到檢測器。以 2-5 mL/min 的速度運行泵，并開始查找原因，。如果問題是出現(xiàn)在分析柱上，請在分析柱與檢測器斷開連接時反轉(zhuǎn)，并沖洗色譜分析柱；在必要的時候更換入口濾芯或更換柱子。

四、裂峰：

       如果發(fā)現(xiàn)峰出現(xiàn)在中間下降形成M形，那么可能是分析柱入口可能存在一些污染；也可能在色譜柱入口處有篩板被堵塞了或存在了不均勻的空隙；還有可能是樣品溶劑與流動相不相容。

       如果是入口處有污染，請反轉(zhuǎn)并沖洗色譜柱，并在需要時更換篩板。還可以用具有相同鍵合相功能的薄膜顆粒重新填充色譜柱頂部，并繼續(xù)以反向流動方向使用色譜柱；如果是問題出在樣品上，請調(diào)整流動相中的樣品，因為樣品和流動相中的 pH 值差異會導(dǎo)致分峰。

五、尾峰和前峰：

       發(fā)現(xiàn)峰不是直線上升和下降，而是開始在前面或后面就形成輕微的傾斜，則稱為前端或尾部。這通?？赡苁潜Ｗo(hù)柱或分析柱受損或是色譜柱過載。如果有拖尾峰，請先移除保護(hù)柱并嘗試分析，必要時就需要更換。如果需要恢復(fù)或更換分析柱。一定要檢查流動相的組成和色譜柱的性能。有前峰的話，請嘗試注入更小的體積或稀釋樣品；如果溶劑有問題請調(diào)整溶劑，并使用 50 柱體積的 HPLC 級乙酸乙酯以標(biāo)準(zhǔn)流速的兩倍或三倍沖洗極性鍵合相柱，然后在開始分析之前使用中等極性溶劑。